La culture in-vitro des graines d'orchidées

Matériel nécessaire

- Un bec électrique (le bec Bunsen étant maintenant interdit dans les établissements scolaires pour des raisons de sécurité vis à vis des risques liés au gaz) ou une hotte anti-bactérienne.

Photographie montrant les becs électriques et les milieux de culture à gauche

- De l’alcool à 95% et de la Javel

-Des flacons contenant le milieu de culture adapté à la culture des graines d'orchidées.

Les graines d'orchidées, étant très pauvres en réserves nutritives, germent dans la nature en effectuant une symbiose avec un champignon.Une symbiose correspond à une association de 2 espèces différentes qui tirent de cette association des bénéfices réciproques.

Schéma montrant la graine d'orchidée à gauche et la germination symbiotique avec le champignon qui donnera la plantule ( document issu du livre la symbiose de Marc André Selosse aux éditions Vuibert)

• Le champignon apporte à la graine dans un premier temps des substances organiques nutritives (sucres...). La plantule se développe au début avec l'aide du champignon.
• Cependant une fois que la plantule est autonome (c'est à dire lorsqu'elle possède une tige feuillée et des racines et qu'elle fabrique elle même sa matière organique à l'aide des matières minérales qu'elle prélève dans le milieu), elle donne à son tour de la matière organique au champignon. D'où le bénéfice réciproque de la symbiose!!!!

La culture in vitro se faisant sans le champignon, il est donc indispensable d'avoir un milieu de culture riche en matières minérales, en vitamines diverses et surtout en matières organiques. Ce milieu de culture est facilement reconnaissable car il a une couleur gris-foncé.

-Des instruments stérilisés: un scalpel pour couper la gousse, une petite spatule pour prélever les graines et les déposer sur le milieu de culture.

- Et bien sûr nos graines contenues dans la gousse. Pour cela on prendra une gousse d'une dendrobium (la gousse étant le fruit de l'orchidée)

Photo d'une gousse(fruit) d'une dendrobium

Précautions avant utilisation

- Mettre une blouse, attacher les cheveux

- Laver entièrement le plan de travail à l’alcool : cela permet de maintenir la stérilité de la table autour du bec électrique.

- Laver le bec électrique à la Javel : cela éliminera les bactéries. L’alcool est déconseillé pour éviter des brûlures (même si les risques sont très réduits avec le bec électrique.

- Se laver les mains à l’alcool et les faire sécher au-dessus du bec électrique.

Attention : A partir de ce moment, les mains ne doivent plus quitter le cône de stérilité restreint autour du bec et toutes les manipulations devront être faites au-dessus du bec électrique.

Protocole

-Désinfection de la gousse. Pour cela, on dépose dessus de l'alcool à 90° et on la flambe à l'aide d'une allumette.

Photographie montrant le dépôt d'alcool sur la gousse afin de la désinfecter

Couper la gousse dans le sens de sa longueur.

Photographie montrant la gousse et des graines microscopiques par milliers! Les graines paraissent comme de la poussière blanche

- Déposer les graines sur le milieu de culture à l'aide de la spatule

Photographie montrant le prélèvement des graines à l'aide de la spatule

Photographie montrant le dépôt des graines sur le milieu de culture

- Reboucher les flacons et les déposer dans l'armoire de culture éclairée par des néons

Photographie montrant les flacons ensemencés

Résultats au bout de 3 semaines

On observe au bout de 3 semaines des petites excroissances vertes donc chlorophylliennes. On appelle cela le caviar vert!

Résultats au bout de 1 mois et demi